免疫印跡（Immunoblotting）又稱蛋白質印跡（Western Blot，WB），是一種綜合性的免疫學檢測技術。它利用SDS-PAGE技術將生物樣品中的蛋白質分子按分子量的大小在凝膠上分離開，然后用電轉移的方法將蛋白轉移到固相膜上，以固相膜上的蛋白質作為抗原，與對應的抗體起免疫反應，再與酶標記的第二抗體起反應，經過底物顯色或熒光成像等方法以檢測電泳分離的特異性目的基因表達的蛋白質。WB技術現已廣泛應用于蛋白水平的表達研究、抗體活性檢測和疾病早期診斷等多個研究領域。
WB基本實驗流程
一、蛋白樣品的制備與定量
蛋白樣品制備是 Western Blotting 的第一步，也是決定 WB 成敗的關鍵步驟之一。蛋白提取總體原則與注意事項包括：1) 盡可能提取完全或降低樣本復雜度使得集中于提取目的蛋白；2) 保證蛋白處于可以溶解狀態（選擇合適的裂解液的pH 、鹽濃度、 表面活性劑、還原劑等）；3) 提取過程防止蛋白降解、聚集、沉淀、修飾等（冰盒中低溫操作，加入合適的蛋白酶和磷酸酶抑制劑）；4) 盡量去除核酸，多糖，脂類等干擾分子。蛋白定量的方法有很多種，應用較多的主要有兩種：BCA蛋白定量檢測法和Bradford蛋白定量檢測法，用RIPA裂解液裂解得到的蛋白樣品，可以用BCA蛋白濃度測定試劑盒測定蛋白濃度，由于含有較高濃度的去垢劑，不能用Bradford法測定由RIPA裂解液裂解得到樣品的蛋白濃度。
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百瑞極RIPA組織/細胞裂解液（BN25011）是一種傳統的細胞組織快速裂解液，得到的蛋白樣品可用于常規的Western、IP等實驗。RIPA裂解液種類很多，根據其裂解液的強度不同分為強、中、弱三類，請根據檢測樣本與檢測目的的不同選擇適當的裂解液。
百瑞極蛋白酶抑制劑Cocktail（BN25002)由6種獨立的蛋白酶抑制劑（不含 EDTA）按照優化的配比配置而成的蛋白酶抑制劑混合物,作用的靶點分別為絲氨酸蛋白酶，絲氨酸半胱氨酸蛋白酶，氨肽酶，半胱氨酸蛋白酶 和天冬氨酸蛋白酶等，是廣譜蛋白酶抑制劑。
百瑞極BCA蛋白濃度測定試劑盒（BN27109)是一種靈敏并且抗干擾能力強的蛋白定量檢測試劑盒，對去垢劑耐受能力強，特別適合用于 RIPA 裂解液提取的細胞和組織蛋白樣品中的蛋白濃度測定。
二、SDS-PAGE電泳
樣品制備完成后，需要通過電泳將不同分子量大小蛋白有效分開，以便能夠檢測目的蛋白的表達水平，廣泛采用的是SDS-PAGE，在電泳體系中加入變性劑SDS和還原劑DTT或者巰基乙醇等，蛋白質分子的多聚體或者高級結構會被打開，蛋白質氨基酸側鏈和SDS結合形成蛋白-SDS復合物，所帶的負電荷大大超過了蛋白質原有的電荷量，因此可以有效消除不同蛋白質分子間的電荷差異和空間結構差異。所以SDS-PAGE檢測時，可以利用分子篩效應將蛋白質依據分子量大小分離開來。
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百瑞極彩虹245廣譜蛋白Marker(11-245KD,BN27002)包含12種彩色預染的已知分子量標準蛋白，可用于直接觀察蛋白質電泳狀況以及清晰地判斷Western Blot的轉膜效果。
百瑞極SDS-PAGE電泳緩沖液（BN20116）為10×Tris-甘氨酸電泳緩沖液，常用于蛋白變性聚丙烯酰胺凝膠電泳實驗，10×濃縮液，便于儲存、操作簡便。
三、轉膜
轉膜是將電泳后分離的蛋白質從凝膠中轉移到固相載體上，同時維持其相對位置和分辨率的過程,主要分兩種：濕轉和半干轉。半干轉耗時短，但是更適合小分子蛋白的轉印，而濕轉蛋白分子量范圍較寬，兩者的比較見表在 Western Blot 實驗中，常用的是濕轉。
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百瑞極10×電泳轉移緩沖液（BN20181）是用于中濕法以及半干法電泳轉膜的緩沖試劑，為10×濃縮液，不含 SDS 和甲醇，便于儲存、操作簡便。
百瑞極WB 封閉液(BN21013)用于轉移后蛋白的NC膜或PVDF膜非特異性結合位點的封閉，可以減少后續的一抗或二抗與膜的非特異性結合，降低背景著色，增強信噪比。
百瑞極膜再生液（BN21014）可以對同一張膜進行多次WB檢測，特點是無毒、無味、無害，室溫下使用，室溫下保存，可對同一張膜進行 5 次以上的WB檢測。
四、免疫反應與檢測
轉膜后凝膠中的蛋白被固定在膜上，需要有效檢測目標蛋白，定性及定量樣品中蛋白質與對應豐度。蛋白印跡檢測使用針對目標蛋白具有特異性的一抗，再雜交酶或熒光分子標記的二抗，然后進行檢測。正確選擇、使用合適的一抗和二抗對于最大化信號，同時降低背景至關重要。蛋白上樣內參的正確使用對于蛋白印跡的信號歸一化也至關重要。
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百瑞極Western一抗/二抗稀釋液（BN21010/21012）是新一代的高效抗體稀釋液，總體效果顯著優于傳統的基于BSA(牛血清白蛋 白)、脫脂奶粉等的抗體稀釋液，有效節約抗體，稀釋液不含血清和白蛋白，確保極高的信噪比。
百瑞極羊抗兔IgG-HRP標記（BN20601）、羊抗小鼠IgG-HRP標記（BN20602），為常用HRP標記二抗。
百瑞極超敏化學發光檢測試劑盒（BN16009）為免疫印跡實驗提供明亮的信號和低皮克級檢測靈敏度，ECL底物能夠兼容各種膜、封閉液和寬范圍抗體稀釋液，以出色性能、通用性和高性價比，滿足用戶的免疫印跡應用需求。
百瑞極提供Western Blot實驗全線常用試劑，具體產品信息請參見產品技術手冊：百瑞極WB實驗系列產品.pdf
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