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瓊脂糖凝膠 6B 是用 6%濃度瓊脂糖制備成的球型顆粒，作為凝膠層析介質使用。

1 理化指標

              *檢測條件： 層析柱 10mm×300mm *柱床高 5cm，25℃，流動相為 0.1mol/LNaCl。

2 貯存 

     產品應密封貯存在 4℃~25℃（保存溶液為 20%乙醇），通風、干燥、清潔的地方。不能冷凍。用過的柱子貯存在 4℃（20%乙醇），保質期：2 年。

3 應用 

     本產品為傳統的瓊脂糖介質，具有非特異性吸附低，回收率高，可多次重復使用等特點，用于分子量差異大、對分辨率要求不高的樣品的凝膠層析純化。

3.1 裝柱 

     （1）讓所有的材料和試劑均平衡至層析實驗的溫度。配制緩沖液，對所有的緩沖液進行脫氣處理。 

     （2）檢查層析柱所有部件，特別是過濾網，密封圈，螺旋塞是否緊密，玻璃管是否干凈和完整。 

     （3）根據需要量取相應量的凝膠，用去離子水清洗掉 20%乙醇。 

     （4）將柱子底端用水或緩沖液潤濕并保持一小段液位，務必使底端無氣泡。 

     （5）用玻璃棒引導勻漿沿著柱內壁一次性倒入柱內，注意勿使產生氣泡。打開柱子出液口，使凝膠在柱內自由沉降，連結好柱子頂端柱頭。 

     （6）打開蠕動泵，讓緩沖液用使用時流速的 1.33 倍的流速流過，使柱床穩定（注意壓力不要超過填料最大耐壓）。

3.2 平衡

     上樣前平衡層析柱至少 5-10 個柱體積，直到記錄儀基線變得平穩為止（流出液的 pH 值和電導值等 于上柱 Buffer 的 pH 值和電導值）。

3.3 上樣 

     （1）樣品用平衡液配制，樣品一定要離心或過濾后上樣（0.45um 濾膜），如果樣品鹽濃度太大，則 需要處理后再上樣。 

     （2）推薦的上樣量不超過柱體積的 5%。

3.4 洗脫 

     用緩沖液洗脫，洗脫中保持流速、緩沖液組成不變。

3.5 再生 

     一般用緩沖液洗到平衡，可再次使用。在一些應用中，諸如變性蛋白質或脂質體物質在再生過程中 洗脫不掉。出現下面這些情況，是必須需要清洗再生的： 

     （1）背壓增加；

     （2）色譜柱頂部的顏色變化； 

     （3）分辨率降低； 

     （4）轉換接頭和凝膠表面之間出現空隙。 如果觀察到壓力增大，在開始柱清潔程序之前先檢查管路中的各個過濾閥、過濾膜是否被污染，然 后通過用 0.1M NaOH 洗滌柱子，除去沉淀的蛋白質，非特異性結合的蛋白質和脂蛋白。

4 注意事項 

     （1）上樣之前，樣品必須經過膜過濾及去除色素，否則雜質及色素會被吸附到填料上，影響填料的正常使用。所有的緩沖液均需要用 0.45um 的過濾器過濾。 

     （2）在使用過程中，避免使用高濃度的強酸強堿，酸和堿的濃度應低于 0.1 摩爾。堿會使流速變慢。 

     （3）不同的樣品，吸附和洗脫方法不相同，可以根據相關的文獻進行。

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