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一、 簡介 

環氧活化瓊脂糖凝膠是采用平均粒徑為90μm的6%交聯瓊脂糖凝膠，表面用大分子糖鏈接枝，使它 有更高的比表面積和更好的生物兼容性，用它合成的親和填料，避免蛋白之間位阻以及蛋白和填料的位 阻干擾，使其同等配基下有更高載量，同時具有更高的分辨率。由于比表面積大，平衡和洗脫的時間也 更短。即使是純化病毒、抗體等生物大分子物質，載量也基本保持不變。

     產品特點： 

      1、偶聯條件溫和，偶聯效率高。

      2、填料不需要處理，直接計算合適的量用于偶聯，縮短時間。

      3、剛性強，流速快。 

      4、可偶聯含有氨基、巰基、羥基的配基，應用范圍廣。

      5、偶聯后制備的親和填料壽命長，流速快，特異性高。

二、 填料特性： 

         基質 高度交聯瓊脂糖凝膠 

         適用范圍 帶氨基、巰基、羥基的物質（多糖，蛋白，核酸，抗體以及其他物質） 

         功能基團 epoxy 

         配基密度 15-30μmol/ml 

         平均粒徑 90μm

         最大流速 200cm/h

三、操作步驟 

用環氧活化瓊脂糖凝膠6B偶聯牛血清白蛋白（BSA）為例： 

1、 取BSA 100mg溶解于10ml的pH9.0 0.25M碳酸鈉緩沖液中； 

2、 用量筒量取環氧活化瓊脂糖凝膠6B 5-6mL； 

3、 將凝膠加入溶解后的BSA溶液中混合，在搖床上振蕩，25℃偶聯6h； 

4、 然后加50mg甘氨酸，再反應6h，封閉剩余的基團。 

5、偶聯了BSA的填料可以裝在柱子中，然后用1M NaCl溶液洗10個柱床體積，收集裝柱子的液體以 及清洗柱子的溶液測定BSA的總量，再用純水沖10個柱床體積，最后將填料在20%乙醇溶液中保 存。如果是大量的偶聯，可以選擇G3砂心漏斗或者濾器上按上面的方法清洗，用20倍填料體積， 分3-5次清洗。 

6、BSA的偶聯量為6 mg/mL。計算方法：BSA的吸附載量=（G0-G1）/V。 

     G0：BSA總使用量，單位：mg。

     G1：偶聯反應后未偶聯的BSA的量，單位：mg。  

      V ：填料的體積，單位：mL。  

     備注：該偶聯方法可用于偶聯單抗及其它蛋白，均能獲得很好的偶聯效果。  

環氧活化的填料的應用注意事項： 

1、活化的填料現取現用，以免時間過長造成偶聯活性降低。如果要偶聯的蛋白不穩定，可在搖床上 4℃振搖偶聯12-16小時，以維持配基的活性。如果沒有把握可以配相應濃度的配基溶液0.5-1ml，分別 選擇不同pH及溫度然后不加填料模擬偶聯條件，到時間觀察溶液是否有沉淀，如果有沉淀偶聯效果就不 好，這時可以稍微降低pH或溫度，同時可以加5%左右的甘油或PEG保護蛋白,避免沉淀，總之對于任何 配基最好能了解其溶解性及穩定性，避免實驗失敗導致損失。 

2、偶聯配基后盡快清洗填料，避免在高pH條件中，配基失活。 

3、更穩定的配基可以直接溶解于NaOH溶液或者碳酸鈉溶液中進行偶聯，溫度可適當提高，偶聯時 間則相應縮短至1-4小時。 

4、偶聯蛋白的最適pH為可以在8.0-10左右，在室溫或4℃均可，溫度與pH的提高均能增加配基的 吸附載量，根據蛋白的穩定選擇合適的pH和溫度，偶聯蛋白溶液的濃度為5-20mg/ml。填料體積和配基 溶液的體積為1:1.5或者為1:2。 

5、偶聯的緩沖液包括碳酸鹽、硼酸鹽和磷酸鹽緩沖液，但絕對不能使用Tris、甘氨酸等含有氨基的 物質。

6、只能夠用于體外實驗，不能夠用于臨床、治療和動物體內實驗等，由此產生的后果，概不承擔責 任。