Phos-tag? Acrylamide
SDS-PAGE 分離不同磷酸化水平的蛋白！
在不使用放射性同位素的情況下，利用 Phos-tag? SDS-PAGE 即可分離不同條帶中的磷酸化和非磷酸化蛋白。分離后的凝膠可用于 Western blotting 和質(zhì)譜分析等后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
Phos-tag? SDS-PAGE 操作簡單，只需在常規(guī) SDS-PAGE 膠中加入 Phos-tag? Acrylamide 和 Mn2+ 或者 Zn2+ 即可進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。在電泳過程中，磷酸化蛋白的磷酸基團(tuán)與 Phos-tag? 中的二價金屬離子相結(jié)合，降低其遷移速度，從而可區(qū)分磷酸化與非磷酸化蛋白。
◆原理
◆優(yōu)點(diǎn)、特色
● 采用 Phos-tag? SDS-PAGE 可輕松分離磷酸化蛋白
無任何放射性元素及化學(xué)標(biāo)記！
● 可檢測不同磷酸化水平的磷酸化蛋白
無需任何磷酸化抗體！
● 適用于內(nèi)源性蛋白的磷酸化分析！
◆案例、應(yīng)用
【使用Phos-tag? SDS-PAGE的磷酸化/非磷酸化蛋白比較】
我推薦使用Phos-tag ? ——東京大學(xué)研究院醫(yī)學(xué)研究科 小川覺之
Phos-tag ? 是專為研究磷酸化蛋白而新開發(fā)出來的試劑。此產(chǎn)品使用方便，不但可用于體外實(shí)驗(yàn)，還能定量分析體內(nèi)蛋白的磷酸化水平。Phos-tag ? SDS-PAGE 可用于常規(guī)電泳實(shí)驗(yàn)，無需購買特殊設(shè)備，性價比高。傳統(tǒng)蛋白磷酸化的研究需要特異的磷酸化抗體、RI 等其它試劑，操作復(fù)雜，花費(fèi)大，且放射性元素會有安全隱患，而 Phos-tag ? 的出現(xiàn)恰恰可以彌補(bǔ)這些缺點(diǎn)，為磷酸化蛋白研究提供新的方向。
磷酸化蛋白和非磷酸化蛋白利用Phos-tag ? SDS-PAGE 的分離效果圖
Lane 1 為非磷酸化蛋白，Lane 2-5 為磷酸化蛋白，各蛋白因磷酸化狀態(tài)不同而條帶遷移率也有所不同。
磷酸化/ 非磷酸化蛋白的數(shù)量比、磷酸化程度、磷酸化蛋白的豐度等都可根據(jù)條帶遷移和條帶濃度求得。
【資料提供】
日本東京大學(xué)研究生院醫(yī)學(xué)系研究科
【二維電泳中的應(yīng)用：分析 hnRNP K 磷酸化異構(gòu)體】
小鼠巨噬細(xì)胞 J774.1 經(jīng) LPS 刺激后，裂解細(xì)胞，經(jīng)過免疫沉淀法分離得到 hnRNP K 。在二維電泳中，一維是IPG 膠，二維是 Phos-tag ? SDS-PAGE，可分離 hnRNP K 的異構(gòu)體。利用質(zhì)譜儀，可以確認(rèn)不同的點(diǎn)代表不同的亞型或修飾蛋白。
二維電泳
同一個等電點(diǎn)的位置上，不同位點(diǎn)發(fā)生磷酸化都可以被區(qū)分開來（例: spots 6 vs. 8 and spots 4 vs. 7）
【參考文獻(xiàn)】
Characterization of multiple alternative forms of heterogeneous nuclear ribonucleoprotein K by phosphate-affinity electrophoresis. Y. Kimura, K. Nagata, N Suzuki, R. Yokoyama, Y. Yamanaka, H. Kitamura, H. Hirano, and O. Ohara, Proteomics , Nov 2010; 10(21): 3884-95.
【結(jié)果提供】
橫濱市立大學(xué) 生命納米系統(tǒng)科學(xué)研究科 生物體超分子系統(tǒng)科學(xué)專業(yè) 木村彌生（Dr. Y. Kimura）、平野久（Dr. H. Hirano）理化學(xué)研究所 RCAI 小原收
【EGF 刺激前后MAPK 磷酸化水平的變化】
常規(guī) SDS-PAGE 和Phos-tagTM SDS-PAGE 后迚行克疫印跡實(shí)驗(yàn)分析 EGF 刺激的 A431 細(xì)胞中 MAPK 磷酸化水平。
摘自 Kinoshita-Kikuta, E. et al., Mol.Cell. Proteomics. (2007)6: 356.
| 產(chǎn)品編號 | 產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 產(chǎn)品等級 |
| 304-93526 | Phos-tag Acrylamide AAL-107 5mM Aqueous Solution Phos-tag 丙烯酰胺5mM水溶液 | 0.3 mL | 蛋白研究 |
| 300-93523 | Phos-tag Acrylamide AAL-107 Phos-tag 丙烯酰胺 | 2 mg | 蛋白研究 |
| 304-93521 | Phos-tag Acrylamide AAL-107 Phos-tag 丙烯酰胺 | 10 mg | 蛋白研究 |
| 134-15302 | Manganese(II) Chloride Tetrahydrate氯化錳四水合物 | 25 g | for Molecular Biology |
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