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BN12050-50T
50T
￥450.00
產品描述
保存條件
10~25℃保存 12 個月。
產品簡介
本試劑盒采用高效結合核酸的離心柱配合獨特的緩沖液系統，適合從 50~100 mg 普通植物中提取基 因組 DNA。試劑盒基于硅膠柱純化技術，提取過程中無需使用有毒的酚氯仿，整個提取過程只需 30~40 min，可最大限度去除植物組織中的雜質，提取的基因組 DNA 片段完整、純度高，可直接用 于下游 PCR 擴增、qPCR、分子標記以及文庫構建等實驗。
產品特點
? 操作簡便：30~40 min 內完成數個樣品的基因組 DNA 提取；
? 安全低毒：無需酚、氯仿等有毒試劑；
? DNA 純度高：提取的基因組 DNA 無雜質殘留，適用于對純度、完整性要求很高的下游實驗。
適用范圍
本產品適用于普通植物樣品的基因組 DNA 提取。
注意事項
1. 第一次使用前應在 Buffer GP3 和 Buffer GW2 中加入無水乙醇，加入量請參考瓶上標簽；
2. 植物組織樣品應避免反復凍融，否則會導致提取的基因組 DNA 片段小且得率低；
3. 使用前請檢查 Buffer GP1 和 Buffer GP2 是否出現結晶或者沉淀，如有沉淀，請置于 37℃水浴 溶解搖勻后使用；
4. 本試劑盒所有離心操作均在室溫下進行。
使用方法
1. 取植物新鮮組織 50~100 mg 或干重組織 20 mg，加入液氮充分研磨。加入 400 μL Buffer GP1 和 6 μL RNase A(10 mg/mL)，渦旋振蕩 1 min，室溫放置 10 min，使其充分裂解；
2. 加入 130 μL Buffer GP2，充分混勻，渦旋振蕩 1 min；
3. 12,000 rpm（~13,400×g）離心 5 min，將上清移至新的離心管中；
4. 加入 1.5 倍體積的 Buffer GP3（使用前檢查是否已加入無水乙醇）（例如 500 μL 上清液加入 750 μL Buffer GP3），立即振蕩 15 s 充分混勻，此時可能出現絮狀沉淀但不影響后續實驗；
5. 將上步所得溶液和沉淀分兩次加入到吸附柱DNA Columns 中（吸附柱放入收集管中），12,000 rpm（~13,400×g）離心 30 s，棄廢液，將吸附柱重新放回收集管中；
6. 向吸附柱中加入 600 μL Buffer GW2（使用前檢查是否已加入無水乙醇），12,000 rpm（~13,400 ×g）離心 30 s，棄廢液，將吸附柱重新放回收集管中；
注意：如吸附膜呈現綠色，向吸附柱中加入 500 μL 無水乙醇，12,000 rpm（~13,400×g）離心 30 s， 棄廢液，將吸附柱重新放回收集管中。
7. 重復步驟 6；
8. 12,000 rpm（~13,400×g）離心 2 min，棄廢液。將吸附柱開蓋置于室溫數分鐘，以徹底晾干吸 附材料中殘余的漂洗液；
注意：此步驟目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除，漂洗液中乙醇的殘留可能會影響后續的酶反應實驗（酶 切、PCR 等）。
9. 將吸附柱放到一個干凈離心管中，向吸附膜的中間部位懸空滴加 50~200 μL Buffer TE 或 ddH2O， 室溫放置 2~5 min，12,000 rpm（~13,400×g）離心 2 min，收集 DNA 溶液，如果要增加基 因組 DNA 的得率，可以將離心得到的溶液重新加至吸附膜上，重復洗脫。將洗脫的 DNA 溶液 置于-20℃保存。
注意：如果下游實驗對 pH 值或 EDTA 敏感，建議用 ddH2O 洗脫，若用 ddH2O 洗脫應保證其 pH 值在7.0~8.5（可以用 NaOH 將水的 pH 值調到此范圍）；若需長期保存，推薦使用 Buffer TE 洗脫后置于- 20℃保存。
常見問題與解決辦法
Q1：柱子出現堵塞？
A1：
1) 樣品用量過多。建議按照說明書推薦量進行提取；
2) 樣品富含多糖多酚類物質。處理富含多糖多酚的組織，推薦用專用試劑盒；
3) 離心溫度過低。本產品使用操作均在室溫下進行。
Q2：DNA 提取得率低？
A2：
1) 樣品用量過少。建議按照說明書推薦量進行提取；
2) 樣品材料質量不好。盡量選用新鮮組織樣品，樣品采集后應液氮速凍，然后置于-80℃保存，建議盡快提取，避免反復凍融；
3) 樣品裂解不充分。若樣品過量則適當減少樣品量，加入 Buffer GP1 后需渦旋振蕩 1min 使其充分混勻，可適當延長裂解時間。
Q3：提取的 DNA 中有 RNA 污染？
A3：
1) 未加入 RNase A 消化。請按照說明書要求加入 RNase A 消化；
2) 樣品中 RNA 含量過多。可適當增加 RNase A 用量或延長消化時間。
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