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儲(chǔ)存條件 4℃保存，一年有效（避免冷凍）。

產(chǎn)品介紹 

     LipoGeneTM 2000 Star Transfection Reagent 是一種非 常高效的新型轉(zhuǎn)染試劑，細(xì)胞毒性更低，轉(zhuǎn)染效果更佳，達(dá)到了國(guó)際最主流轉(zhuǎn)染試劑的轉(zhuǎn)染效果。適用于把質(zhì)粒、 siRNA 或其它形式的核酸包括 DNA、RNA、寡核苷酸轉(zhuǎn)染 到真核細(xì)胞中。

     LipoGeneTM 2000 Star Transfection Reagent 對(duì)于常見的 哺乳動(dòng)物細(xì)胞具有非常高的轉(zhuǎn)染效率、重復(fù)性好、操作簡(jiǎn)單、 無(wú)明顯的細(xì)胞毒性，并且對(duì)于貼壁細(xì)胞和懸浮細(xì)胞都適用。

     LipoGeneTM 2000 Star Transfection Reagent 轉(zhuǎn)染試劑的 使用方法和常用的 Lipofectamine?2000 Reagent 完全一致， 轉(zhuǎn)染效率比 Lipofectamine? 2000 Reagent 更高。

     LipoGeneTM 2000 Star Transfection Reagent 轉(zhuǎn)染試劑不 僅適用于質(zhì)粒、siRNA 等單一成分的細(xì)胞轉(zhuǎn)染，也適合多個(gè) 質(zhì)粒或者質(zhì)粒與 siRNA 等的組合轉(zhuǎn)染。

     LipoGeneTM 2000 Star Transfection Reagent 轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn) 染過(guò)表達(dá)質(zhì)粒后，通常 24-48 h 后達(dá)到較高的蛋白表達(dá)水平， 并且很多情況下蛋白表達(dá)量在轉(zhuǎn)染后 48 h 顯著高于轉(zhuǎn)染后 24 h；轉(zhuǎn)染 siRNA 通常 3-5 天后對(duì)于目的基因的下調(diào)水平會(huì) 比較理想。

     LipoGeneTM 2000 Star Transfection Reagent 轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn) 染細(xì)胞時(shí)，基本不受細(xì)胞培養(yǎng)液中血清影響，即可以在血清存在的情況下進(jìn)行細(xì)胞轉(zhuǎn)染。但為了取得最佳的轉(zhuǎn)染效果， 推薦轉(zhuǎn)染時(shí)使用不含抗生素培養(yǎng)液。轉(zhuǎn)染后不必去除轉(zhuǎn)染液， 或者改變或添加培養(yǎng)基，但轉(zhuǎn)染 4-6 h 后可去除轉(zhuǎn)染液。

使用方法

     1. DNA 轉(zhuǎn)染 下列步驟適用于 24 孔板培養(yǎng)的哺乳動(dòng)物細(xì)胞，至于其 他培養(yǎng)材料，請(qǐng)參考轉(zhuǎn)染規(guī)模調(diào)整，所有數(shù)量和體積均是按孔計(jì)算。大部分細(xì)胞系所使用的 DNA（μg）與 LipoGeneTM 2000 Star Transfection Reagent（μL）的比值為 1: 2 到 1: 3， 轉(zhuǎn)染高密度細(xì)胞可獲得高轉(zhuǎn)染效率、高表達(dá)水平和低細(xì)胞毒 性。優(yōu)化轉(zhuǎn)染是必需的（見優(yōu)化質(zhì)粒 DNA 轉(zhuǎn)染）。 

A. 貼壁細(xì)胞：轉(zhuǎn)染前一天每孔 0.5-2×105個(gè)細(xì)胞接種于 500 μL 不含抗生素的培養(yǎng)基中，在轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞可長(zhǎng)至 70-90%匯合度。

懸浮細(xì)胞：在配制轉(zhuǎn)染液前每孔 4-8×105 個(gè)細(xì)胞接種于 500 μL 不含抗生素的培養(yǎng)基中。 

B. 轉(zhuǎn)染液制備，每孔細(xì)胞用量如下：

     a. 用 50 μL Opti-MEM 低血清培養(yǎng)基（或者其他無(wú)血 清培基） 稀釋質(zhì)粒 DNA，輕輕混勻。 

     b. 使用前輕輕搖勻 LipoGeneTM 2000 Star Transfection Reagent ， 然 后 取 適 量 LipoGeneTM 2000 Star Transfection Reagent 在 50 μL Opti-MEM 培養(yǎng)基中稀釋，室溫孵育 5 min。 注意：請(qǐng)?jiān)?25 min 內(nèi)進(jìn)行下一步操作。 

     c. 將前兩步所稀釋的 DNA 和 LipoGeneTM 2000 Star Transfection Reagent 混合（使總體積為 100 μL），輕輕混勻， 室溫放置 20 min（溶液可出現(xiàn)濁）。

     注意：轉(zhuǎn)染復(fù)合物常溫下可在 6 h 內(nèi)保持穩(wěn)定。

C. 在每孔細(xì)胞中加入 100 μL 轉(zhuǎn)染液，輕輕搖勻。 

D. 37℃培養(yǎng) 18-48 h 后檢測(cè)基因表達(dá)，轉(zhuǎn)染 4-6 h 后可更換 培養(yǎng)基。 對(duì)于穩(wěn)定轉(zhuǎn)染，在轉(zhuǎn)染 24 h 后以 1: 10 稀釋接種于新鮮培養(yǎng)基中，第二天可加入選擇培養(yǎng)基。

優(yōu)化 DNA 轉(zhuǎn)染 

     可通過(guò)改變細(xì)胞密度、質(zhì)粒 DNA 密度和 LipoGeneTM 2000 Star Transfection Reagent 濃度以優(yōu)化轉(zhuǎn)染。要保證細(xì)胞融合 在 90% 以 上 ， DNA (μg): LipoGeneTM 2000 Star Transfection Reagent (μL)可在 1: 0.5 到 1: 5 之間進(jìn)行調(diào)整。

2. RNAi 或 siRNA 轉(zhuǎn)染 

     下列步驟適用于 24 孔板培養(yǎng)的哺乳動(dòng)物細(xì)胞，至于其 他培養(yǎng)材料，請(qǐng)參考轉(zhuǎn)染規(guī)模調(diào)整，所有數(shù)量和體積均是按 每孔計(jì)算。

A. 轉(zhuǎn)染前一日，將細(xì)胞接種于 500 μL 不含抗生素的培養(yǎng)基 中，使其在轉(zhuǎn)染時(shí)長(zhǎng)至 30-50%匯合度。 

B. 轉(zhuǎn)染液制備，每孔細(xì)胞用量如下：

     a. 用 50 μL Opti-MEM 低血清培養(yǎng)基（或者其他無(wú)血 清基）稀釋 20 pmol siRNA（轉(zhuǎn)染時(shí) siRNA 終濃度為 33 nM）， 輕輕混勻。

     b. 使用前輕輕搖勻 LipoGeneTM 2000 Star Transfection Reagent ， 然 后 取 1 μL LipoGeneTM 2000 Star Transfection Reagent 在 50 μL Opti-ME I 培養(yǎng)基中稀釋，室溫孵育 5 min。 

     注意：請(qǐng)?jiān)?25 min 內(nèi)進(jìn)行下一步操作。 

     c. 將前兩步所稀釋的 RNA 和 LipoGeneTM 2000 Star Transfection Reagent 混合（使總體積為 100 μL），輕輕混勻， 室溫放置 20 min（溶液可出現(xiàn)渾濁）。

C. 在每孔細(xì)胞中加入 100 μL 轉(zhuǎn)染液，輕輕搖勻。37℃培養(yǎng) 24-96 h 后檢測(cè)基因表達(dá)，轉(zhuǎn)染 4-6 h 后可更換培養(yǎng)基。 

siRNA 轉(zhuǎn)染優(yōu)化

     可 調(diào) 整 siRNA 與 LipoGeneTM 2000 Star Transfection Reagent 的用量以優(yōu)化轉(zhuǎn)染，在 24 孔板，siRNA 可在 10-50pmol 之間調(diào)整，LipoGeneTM 2000 Star Transfection Reagent 可在 0.5-1.5 μL 之間調(diào)整，在增加細(xì)胞密度時(shí)也應(yīng)優(yōu)化轉(zhuǎn)染 劑量。

轉(zhuǎn)染規(guī)模調(diào)整 

不同培養(yǎng)材料轉(zhuǎn)染液、細(xì)胞和培養(yǎng)基的用量按照培養(yǎng) 材料面積換算。在 96 孔板細(xì)胞高通量自動(dòng)分析系統(tǒng)，推薦 每孔使用 50 μL 轉(zhuǎn)染液。

注意：在 96 孔板，可將細(xì)胞直接接種于轉(zhuǎn)染液中以實(shí) 現(xiàn)快速轉(zhuǎn)染，直接在培養(yǎng)板中配制轉(zhuǎn)染液 100μL，直接將細(xì)胞加入培養(yǎng)板中，其密度為上述方法的 2 倍，細(xì)胞在轉(zhuǎn)染液中可正常貼壁。

注意事項(xiàng)

1. 使用高純度的DNA或RNA有助于獲得較高的轉(zhuǎn)染效率。 

2. 轉(zhuǎn)染前細(xì)胞必須處于良好的生長(zhǎng)狀態(tài)。 

3. 需自備不含抗生素的無(wú)血清培養(yǎng)液或 Opti-MEM?培養(yǎng) 液或普通的 DMEM 培養(yǎng)液。

4. LipoGeneTM 2000 Star Transfection Reagent 轉(zhuǎn)染試劑不能 vortex 或離心，宜緩慢晃動(dòng)混勻。 

5. LipoGeneTM 2000 Star Transfection Reagent 轉(zhuǎn)染試劑使用 后請(qǐng)立即蓋好蓋子，避免長(zhǎng)時(shí)間暴露在空氣中，影響轉(zhuǎn)染效 率。

6. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。